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8種常見液相色譜峰解析的分析
發布日期:2019-11-19 作者:分析測試百科網 瀏覽量:
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1、拖尾峰
1、
篩板阻塞
:
柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞,樣品就會在篩板部分受阻而形成時間延遲,使得樣品在柱后流出時峰型形成拖尾。
需要通過反沖色譜柱,或者更換篩板。
2、
色譜柱塌陷
:
是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失,不能對物質形成保留,使得物質不在固定相上保留而隨流動相流出,但是又還有一點柱效,因此形成拖尾。
需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。
3、
有污染
:
即樣品不在同一起跑線起跑,從后面開始跑得到達終點稍晚,表現出拖尾。
更換色譜柱或者采用有機溶劑梯度洗脫1h以上,以沖洗柱子。
4、
流動相PH值選擇錯誤
:
如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動態平衡,離子型的陸續向分子型轉化就會表現出拖尾。
調節PH值可抑制分子解離,改善拖尾,對于堿性化合物,相對較低的PH值更有利于得到對稱峰。
2、前沿峰
1、
樣品過載
:
被保留的樣品在正常出峰時間前陸續出來,形成前沿峰。
降低樣品含量。
2、
樣品溶劑選擇不恰當
:
當樣品溶劑的洗脫能力大大強于流動相時會出現前沿峰,例如,在反相色譜中用已腈做樣品溶劑,而流動相的洗脫力較弱時會出現前沿峰。
選擇流動相或者接近流動相的比例作為樣品溶劑。
3、
色譜柱損壞
:
色譜柱柱效損失,不能對物質形成保留。
更換色譜柱。
4、
在大峰前有小峰出現,假象前沿峰,即大峰前包埋了沒有分開的小峰。
調整流動相洗脫梯度。
3、倒峰
1、樣品折射率小:
示差折光檢測器測的信號是折射率,出現倒峰的原因是組分的折射率小于流動相。
2、密度的原因:
密度不一樣,出來的峰正倒不一樣。
3、進樣所致:
進樣時,樣品對原有流動相產生瞬間阻斷,然后瞬間涌流,所以產生先倒后高的“溶劑峰”。
4、基本不可避免:
試著使用與流動相相同的溶劑作為溶樣溶劑,另外進樣之前注意平衡跟沖洗參比池。
倒峰基本上不能避免,但是這樣操作會小些。
4、包裹
1、色譜柱問題:
色譜柱流失,柱子被污染。
2、樣品溶解度差:
溫度可能會影響到溶解度。
3、流動相不均勻:
一般是流動相沒配好,管路流動相不均勻,也會導致上述現象。
5、基線漂移
1、
柱溫波動
:
即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動,通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。
使用柱溫箱,控制好柱子和流動相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器。
2、流動相不均勻
:
流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。
使用HPLC級的溶劑,流動相在使用前進行脫氣處理。
3、
流通池被污染或有氣體
:
用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。
如有需要,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
4、
流動相配比不當或流速變化
:
更改配比或流速,為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。
5、
樣品中有強保
留的物質
:
以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現出一個逐步升高的基線。
使用保護柱,如有必要,在進樣之間或在分析過程中,定期用強溶劑沖洗柱子。
6、出現寬峰
1、
色譜柱污染或失效
,造成塔板數降低:
更換同樣類型的色譜柱,如果新柱子可以提供對稱的色譜峰,則用強溶劑沖洗舊柱子。
2、
柱子與檢測器之間的管路太長或管路內徑太大
:
更換內徑較小的短管路。
3、
檢測器對反應時間或池體積響應過大
:
減少響應時間或使用更小的流通池。
7、基線噪音
1、
在流動相、檢測器或泵中有空氣(尖銳峰)
:
流動相脫氣,沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣。
2、
漏液
:
檢查管路接頭是否松動,泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。
如有必要,更換泵密封。
3、
流動相混合不完全
:
用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑。
4、
溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱)
:
使用柱溫箱,減少溫度差異或加上熱交換器。
5、
在同一條線上有其他電子設備(偶然噪聲)
:
斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正。
采用精密級穩壓電源。
8、分離度不夠
1、
流動相梯度洗脫設置不合理
:
優化梯度洗脫程序。
2、
流動相污染或變質(引起保留時間變化)
:
重新配置流動相。
3、
保護柱或分析柱阻塞
:
去掉保護柱進行分析,如果必要則更換保護柱;
如果分析柱阻塞,可進行反沖;
如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞,建議使用恰當的再生程序;
如果問題仍然存在,進口可能阻塞了,更換入口處的篩板或更換色譜柱。
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